x تبلیغات
شرکت نور صنعت تجهیز فردوس

مراحل آسان برای تمیز کردن کامل هود کشت بافت

 هود کشت بافت

مراحل آسان برای تمیز کردن کامل هود کشت بافت

مقدمه:

هود کشت بافت شما، هود لامینار کلاس1 ،هود لامینار افقی ،هود لامینار، کابینت ایمنی زیستی یا (BSC)،هود موجود در اتاق کشت بافت شما یا هر چیزی که دوست دارید اسمش را بگذارید، ابزار گرانبهایی است که نیاز به عشق گاه و بیگاه دارد. در اینجا ما به شما آموزش می دهیم که چگونه هود کشت بافت خود را به درستی تمیز کنید و خطر چسبیدن علامت “آلوده” را در آزمایشگاه خود به درب اتاق کشت بافت کاهش دهید.

در کودکی یادم می آید که یاد گرفتم چگونه کف آشپزخانه را به درستی تمیز کنم. نمیدانم چه کسی این را به من گفت، اما توصیه ای که به من شد این بود:

زمین باید آنقدر تمیز باشد که بتوانید از آن غذا بخورید!”

این توصیه عالی است که باعث می شود در مورد تمیزی بیشتر به یک کمال گرا تبدیل شوید، بنابراین من پیشنهاد می کنم که همین امر در مورد هود کشت بافت گیاهی شما نیز صادق باشد.

اکنون هیچ کس به شما پیشنهاد نمی کند که در حین تقسیم سلول ها از quesadilla بعدی خود لذت ببرید، اما تعداد بیشماری از محققان ماه ها یا حتی سال ها کار خود را به دلیل آلودگی از دست داده اند، بنابراین حفظ این اصطلاح می تواند به خوبی شما را در این راه نجات دهد. تکنیک آسپتیک خوب کلیدی برای به حداقل رساندن آلودگی است، اما این تنها تا جایی که آزمایشگاه کامل باشد می تواند پیش رود. برای کاهش بیشتر خطرات به یک نسخه پشتیبان نیاز دارید: به طور منظم هود خود را تمیز کنید. در اینجا قصد داریم نحوه انجام این کار را به شما آموزش دهیم.

این سطح از تمیز کردن عمیق بهتر است هر ماه یکبار انجام شود ، بنابراین یک برنامه زمانبندی چرخشی داشته باشید و از افراد بخواهید هنگام انجام این کار امضا کنند. این مراحل را در اتاق کشت بافت سنجاق کنید. قبل از شروع، مطمئن شوید که می دانید با چه نوع هودی کار می کنید. این مراحل کابینت‌های ایمنی بیولوژیکی را پوشش می‌دهند، زیرا آنها متداول‌ترین نوع هود برای اتاق‌های کشت بافت هستند، اما می‌توان آن‌ها را در کابینت‌های کلاس1و هودهای بخار نیز اعمال کرد (اگرچه نیازی به دقت لازم نیست). در نهایت، هر دستگاهی که برای این کار نیاز دارید با رنگ قرمز مشخص شده است، بنابراین آنها را آماده کنید.

تمیز کردن هود کشت بافت

چگونه هود لامینار کلاس 1 را تمیز کنیم:

مرحله 1:

به مردم سر بزنید که روز پاکسازی فرا می رسد.

زمان و تاریخ تمیز کردن هود کشت بافت را به همکاران خود اطلاع دهید تا افراد بتوانند بر اساس آن برنامه ریزی کنند.

علامتی رو ی در قرار دهید و در صور ت نیاز هود های جایگزین را برای استفاده در این مدت پیدا کنید.

مرحله 2:

مطمئن شوید که هیچ در یا پنجره ای در اتاق باز نیست.

پنجره ها هرگز نباید در اتاق کشت بافت باز شوند و درها باید همیشه بسته باشند. این همیشه وجود دارد، اما به ویژه در هنگام تمیز کردن ضروری است.

مرحله 3:

فضا ی خود را تنظیم کنید.

یک سینک یا حوض بزرگ و همچنین قسمتی برا ی خشک شدن چیزها، مانند قفسه خشک کن، تنظیم کنید. شما همچنین به مواد شوینده نیاز دارید. من توصیه می کنم از مواد شوینده ترجیحی آزمایشگاه خود استفاده کنید، اما توجه داشته باشید که 10درصد سفید کننده رو ی فلز خورنده است، بنابراین توصیه نمیشود. مواد شوینده ظرفشویی یا مواد شیمیایی آزمایشگاهی مانند  Alconox هر دو عالی هستند زیرا باقیمانده ای باقی نمیگذارند یا به فلز یا ظروف شیشه ای آسیب نمیرسانند. به یاد داشته باشید که محلول نیاز ی به استریل کردن کامل ندارد زیرا استریل کردن در مرحله  8انجام می شود. من دوست دارم سینک را با آب بسیار داغ و مواد شوینده از قبل در آب در حالی که به مرحله  4و5می روم بگذارم.

مرحله 4:

هر وسیله ای را که به طور دائم در کاپوت نگهداری می شود بیرون بیاورید.

این شامل پیپت ها، جعبه ها ی نوک، قفسه ها، درختان پیپت و هر دستگاه دیگری است که در آنجا زندگی می کند. آنها را در اتاق دور از سر راه بگذارید، مانند یک حصیر یکبار مصرف یا دستمال کاغذی. در مرحله  10به آنها خواهیم رسید.

مرحله 5:

کاپوت را از بین ببرید.

برای این مورد از دفترچه را هنمای هود خود استفاده کنید . قاعده کلی در اینجا این است که اگر بتوانید آن را حذف کنید، باید خارج شود. از معرفی پیچ گوشتی در جایی که لازم است نترسید. حتما تًوجه داشته باشید که چگونه کاپوت را ازهم جدا کردید تا در موقعیت مبلمان  IKEAقرار نگیرید (روی زمین نشسته اید که توسط قطعات احاطه شده است و گریه می کنید، ” هیچ را هی وجود ندارد که این قطعات با هم هماهنگ شوند! چه کسی این کتابچه راهنمای احمقانه را طراحی کرده است!”) قسمت هایی ازهود را که برداشته اید به سینک آب صابون اضافه کنید و بگذارید بماند تا مرحله  7را ادامه د هید.

برحذر بودن! ماندن فلز در طول شب در آب ممکن است باعث زنگ زدگی آن شود!

مرحله 6:

برو دنبال گنج.

پس از بیرون آوردن قطعات قابل جابجایی، از آنچه خواهید یافت شگفت زده خواهید شد. همچنین این ایده به شما می د هد که مردم واقعا درهنگام استفاده از هود چقدر مراقب هستند! هر گونه سرپوش، نوک و موارد مشابه را بردارید. تمام سطوح هود را با آب صابون و سپس  70درصد اتانول پاکً کنید و از پشت شروع کنید و به سمت جلو حرکت کنید. بازهم، محصولاتی که حاوی سفید کننده هستند در اینجا ایده آل نیستند زیرا نمیخواهید به هود آسیب برسانید.

ارسی و قسمت بیرونی کاپوت را فراموش نکنید. پس از اتمام این مرحله، ارسی را ببندید و لامپ  UV را به مد ت  1520دقیقه روشن کنید.

مرحله 7:

هر چیزی را که در سینک میگذارید با اسفنج یا مشابه آن بشویید. این برای از بین بردن هر گونه آلودگی *فاحش است. بشویید و بگذارید تا رو ی یک قفسه هوا خشک شود یا مستقیما بًه مرحله  8بروید.

*ناخالص در اینجا به معنای بزرگ به جا ی  ickyاست. همه آلودگی ها یخ زده است!

مرحله 8:

موج گرما در اتوکلاو.

تمام شیشه و ظروف فلزی خود را به اتوکلاو اضافه کنید تا کاملاً استریل شوددما و فشار باید برای از بین بردن هر گونه اشکالی که ممکن است وجود داشته باشد کافی باشد.

مرحله 9:

دوباره با هم.

کاپوت خود را دوباره کنار هم قرار د هید. مطمئن شوید که قطعات را با استفاده از دستکش هایی که با اتانول  70درصد تمیز شده اند از اتوکلاو خارج کنید.

پس از خارج شدن از اتوکلاو، تمام قطعا ت باید فقط با دستکش کار شوند.

مرحله 10:

دستگاه خود را خنثی کنید.

هر پیپت و سایر وسایلی را که در هود قرار دارند جدا کنید و آنها را کاملا تمیز و استریل کنید.

من دوست دارم این قسمت را دوام بیاورم زیرا در غیر این صورت شما همه چیز را کاملا تمیز کرده اید اما نمی توانید بلافاصله آنها را در کاپوت برگردانید. قبل از قرار دادن هر چیزی در هود خود که اکنون کاملا تًمیز است، با آن اتانول  ٪70بدون پاک کردن اسپری کنید.

تبریک می گویم! هود شما اکنون بدون آلودگی است!

استفاده از شعله های باز در کابینت های ایمنی زیستی یا هودهای کشت بافت

هود کشت بافت

استفاده از شعله های باز در کابینت های ایمنی زیستی یا هودهای کشت بافت

مقدمه ای از هودهای کشت بافت:

میکروبیولوژیست های اولیه برای اطمینان از عقیمی در حین درگیر شدن در تکنیک های خاص، مجبور بودند به شعله های آتش باز تکیه کنند. با پیشرفت تکنولوژی مدرن، از جمله معرفی هودهای کشت بافت، استفاده از شعله باز تقریباً همیشه دیگر ضروری نیست. در واقع استفاده از شعله باز در هودهای کشت بافت سبب می شود:

  • جریان هوا را مختل می کند و حفاظت از کارگر و کار را به خطر می اندازد.
  • باعث ایجاد گرمای بیش از حد می شود، ممکن است به فیلترهای HEPA آسیب برساند و/یا چسب نگهدارنده فیلتر را ذوب کند و در نتیجه یکپارچگی هود را به خطر بیندازد.
  • خطر آتش سوزی یا انفجار بالقوه را نشان می دهد. اجزای الکتریکی مانند موتور فن، چراغ ها و پریزهای برق برای کار در اتمسفرهای قابل اشتعال طراحی نشده اند، جایی که آتش فلاش می تواند توسط جرقه مشتعل شود (شکل 5).
  • ضمانت‌های تولیدکنندگان در کابینت را غیرفعال می‌کند: سازندگان هود در صورت آتش‌سوزی، انفجار یا قرار گرفتن در معرض کارگران به دلیل استفاده از گاز قابل اشتعال در کابینت هیچ مسئولیتی را بر عهده نمی‌گیرند. علاوه بر این، تأییدیه UL به طور خودکار باطل خواهد شد.

هود کشت بافت

شکل 6. نحوه تنظیم منطقه کاری در کابینت ایمنی زیستی

هود لامینار

شکل 7. هشدارهای جهانی علائم خطر زیستی

توصیه ها برای هودهای کشت بافت:

دانشگاه استنفورد موضعی قوی در برابر استفاده از مشعل های گاز یا شعله های الکلی در هودهای کشت بافت اتخاذ کرده است. این تصمیم بر اساس توصیه های بسیاری از سازمان ها گرفته شده است. مرکز کنترل و پیشگیری از بیماری‌ها (CDC) گزارش می‌دهد که «شعله‌های باز در محیط‌های تقریباً عاری از میکروب کابینت ایمنی بیولوژیکی لازم نیست» و «آشفتگی‌هایی را ایجاد می‌کند که الگوی هوای وارد شده به سطح کار را مختل می‌کند» و به خطر می‌اندازد. استریل بودن محل کار این نیز توصیه سازمان بهداشت جهانی (WHO) و همچنین تولیدکنندگان بزرگ هودهای کشت بافت گیاهی است.

استفاده از چنین دستگاه هایی نه تنها بسیار خطرناک است، بلکه می تواند ضمانت های سازنده را نیز غیرفعال کند. جایگزین های زیادی برای استفاده از مشعل ها وجود دارد: میکرو سوزاننده ها، منابع کشت بافت یکبار مصرف و غیره.

راه حل ها:

  • از شیوه های کاری خوب BSC پیروی کنید (شکل 6)
  • مشعل های Bunsen را بردارید و/یا با فناوری جایگزین مانند زباله سوزهای الکتریکی جایگزین کنید.
  • از حلقه های یکبار مصرف، پخش کننده ها و سایر ابزار استفاده کنید.
  • ابزار اتوکلاو مانند موچین، قیچی و چاقوی جراحی.
  • میزان مواد شیمیایی قابل اشتعال را در هود لامینار کاهش دهید. فقط برای یک روز کار به اندازه کافی از الکل استفاده کنید.
  • از الکل برای استریل کردن شیشه و غیره استفاده کنید. اجازه دهید قبل از باز کردن تبخیر شود یا با کیم وایپ خشک شود.
  • اگر برای کار انجام شده کاملا ضروری تشخیص داده می شود، از مشعل بدون خلبان یا میکرو مشعل صفحه لمسی برای تامین شعله در صورت نیاز استفاده کنید.

هود لامینار کلاس1

شکل 8. تابلوهای خطر زیستی برای مناطق کاری BSL-2 و 3.

اطلاعات مهم:  استفاده از BSC: بهترین روش ها برای هود کشت بافت

  • BSC را روشن کنید و بگذارید 5 تا 10 دقیقه قبل از استفاده کار کند.
  • سطوح کابینت را با مواد ضدعفونی کننده مناسب پاک کنید.
  • سطح کار را از «تمیز» به کثیف بچینید، توری های هوا را از مواد دور نگه دارید.
  • پس از استفاده تمام مواد را ضد عفونی کرده و از کابینت خارج کنید.
  • پس از استفاده، BSC را به مدت 5 تا 10 دقیقه بگذارید.
  • سطوح کابینت را با مواد ضدعفونی کننده مناسب پاک کنید.

 

آلودگی کشت بافت و 7 گام آسان برای پیشگیری

 

آلودگی کشت بافت و 7 گام آسان برای پیشگیری

باز هم آلودگی!

کشت بافت یک فرآیند طولانی و پر زحمت است و زمانی که قارچ یا باکتری به کشت های دوست داشتنی ما حمله می کند، احساس آزاردهنده می کند.

کشت سلول ها در آزمایشگاه ها نیازمند تلاش زیادی است، از آماده سازی محیط و انتقال سلول گرفته تا نگهداری منظم. اما متأسفانه، اگر سلول‌ها آلوده شوند و کشت‌ها از بین بروند، منجر به از دست دادن زمان، تلاش و هزینه زیادی می‌شود. اگر ندانید کشت شما چگونه آلوده شده و چه نوع آلودگی دارد، مشکل بزرگتر می شود!

ویرانگر است و شما چاره ای جز تکرار آزمایشات برای نجات تحقیقات خود ندارید.

انواع آلودگی کشت بافت

آلودگی کشت بافت به دو گروه آلودگی شیمیایی و آلودگی بیولوژیکی طبقه بندی می شود .

آلودگی شیمیایی

آلودگی شیمیایی به دلیل وجود هر گونه اجزای غیر زنده ای رخ می دهد که بر رشد کشت شما تأثیر منفی می گذارد.

منابع و انواع آلودگی های شیمیایی عبارتند از:

محیط کشت : محیط کشت سلولی حاوی مواد مغذی، معرف ها و آب است که منابع اصلی آلودگی هستند.

سرم: تقویت کننده مواد مغذی برای کشت سلولی است. حاوی پروتئین، هورمون و برخی عوامل رشد است که رشد بافت را تحریک می کند. با این حال، تغییر در غلظت هورمون‌ها و فاکتورهای رشد می‌تواند برای کشت‌های سلولی سمی باشد.

اندوتوکسین: محصول جانبی باکتری های گرم منفی است و در آب، سرم یا سایر اجزای کشت یافت می شود. می توان آن را با روش لیمولوس آمبوسیت لیزات (LAL) تعیین کرد.

لوله‌های پلاستیکی و مخازن ذخیره‌سازی: باقیمانده‌های شیمیایی (مواد شوینده یا ضدعفونی‌کننده‌ها) در ظرف ذخیره‌سازی تمیز نشده هنگام انتقال به ظروف به داخل محیط می‌روند. علاوه بر این، نرم کننده ها نیز می توانند بر رشد کشت تأثیر بگذارند.

نور فلورسنت: می‌تواند برخی از اجزای رسانه‌ای مانند ریبوفلاوین و تریپتوفان را که پراکسید هیدروژن و رادیکال‌های آزاد سمی برای سلول‌ها آزاد می‌کنند، فعال کند.

آلودگی بیولوژیکی

آلودگی بیولوژیکی به دلیل وجود موجودات زنده در کشت ایجاد می شود. چنین ارگانیسم هایی شامل باکتری ها، مخمرها و کپک های به راحتی قابل شناسایی یا ویروس ها، تک یاخته ها و مایکوپلاسماها هستند.

باکتری ها، مخمرها و کپک ها در طبیعت در همه جا وجود دارند. بنابراین، آنها به راحتی می توانند به صورت مخفیانه وارد شوند، مستعمره شوند و در کشت های سلولی رشد کنند. از آنتی بیوتیک ها برای جلوگیری از کشت باکتری ها استفاده می شود، با این حال، برخی از سویه های مقاوم همچنان می توانند در آن رشد کنند.

باکتری‌های بسیار کوچک یا درون سلولی با رشد آهسته‌ای وجود دارند که به سختی می‌توان در طول بررسی‌های معمول کشت‌ها متوجه آنها شد. آنها می توانند به چندین کشت آسیب جدی وارد کنند.

شناسایی ویروس، تک یاخته و مایکوپلاسما که ماهیت درون سلولی دارند دشوار است. آنها نه تنها کل کشت سلولی را از بین می برند بلکه خطرات بالقوه ای برای سلامت انسان نیز به همراه دارند.

بهترین راه برای جلوگیری از آلودگی چیست؟

برای جلوگیری از آلودگی و صرفه جویی در کشت و آزمایش خود، باید اقدامات احتیاطی ارائه شده در زیر را «قبل و در حین» آزمایشات کشت بافت خود دنبال کنید:

دستکش و کت آزمایشگاه بپوشید و سازماندهی کنید: آیا تا به حال فکر کرده اید که ممکن است خودتان سلول های کشت شده را آلوده کنید؟ بله این درست است! بدن انسان مملو از باکتری است. بنابراین، بهتر است از دستکش و کت آزمایشگاهی خود استفاده کنید. باید در داخل آزمایشگاه نگهداری شود و به طور مرتب تمیز شود. همچنین می‌توانید چیزهایی را که باید به اتاق تأسیسات ببرید فهرست کنید و این به شما کمک می‌کند تا آزمایش‌های خود را در یک مرحله به پایان برسانید.

از مواد شیمیایی با عیار بالا استفاده کنید: در آزمایشات خود فقط از رسانه ها و سرم های معتبر و با درجه بالا استفاده کنید. همچنین آب و محیط کشت باید به خوبی استریل شود.

تجهیزات آزمایشگاهی را استریل کنید: تجهیزات آزمایشگاه را همیشه اتوکلاو کنید، مانند نوک پیپت، ظرف ذخیره، بشر، فورسپس و غیره. قبل از آن، مطمئن شوید که تجهیزات شما قابل اتوکلاو هستند!

امکانات را بررسی کنید: به طور منظم مرکز یا اتاقی را که سلول ها در آن کشت می شوند تمیز و استریل کنید. عملکرد جریان آرام و انکوباتورها را نیز بررسی کنید. قبل از انجام آزمایش، سطح لامینار و سایر تجهیزات را با الکل 70 درصد پاک کنید.

بررسی سلول‌های وارد شده: اگر سلول‌ها را از یک شرکت یا آزمایشگاه‌های دیگر وارد می‌کنید، بهتر است سلول را با کشت کشت حداقل به مدت دو هفته بررسی کنید. این به شما کمک می کند تا قبل از اینکه سلول ها را در مقیاس بزرگ کشت کنید، در واکنشگرها و تلاش خود صرفه جویی کنید.

از قرار گرفتن سلول در محیط های استریل نشده اجتناب کنید: همیشه سعی کنید سلول ها را در یک محیط استریل نگه دارید. انتقال سلول ها از انکوباتور به هود باید سریع باشد. اگر سلول های شما برای مدت طولانی بیرون مانده اند، آنها را در یک هود دیگر نگه دارید. این به شما کمک می کند تا کشت های دیگر خود را نیز نجات دهید.

به طور منظم سلول های کشت شده را بررسی کنید: شما کارهای زیادی برای محافظت از سلول های خود انجام داده اید و نمیخواهید در پایان کشت خود را آلوده کنید! بنابراین، مراقب کشت های خود باشید و به طور مرتب آنها را تماشا کنید.

اگرچه، به احتمال زیاد با دنبال کردن مراحل بالا می‌توانید کشت خود را نجات دهید، دقیق بودن و سازگاری با «بهترین شیوه‌ها» به همان اندازه دشوار است. با این روش ها فقط می توانید از آلودگی شیمیایی و تا حدی آلودگی بیولوژیکی نیز جلوگیری کنید. اما،با شروع مقاومت باکتری ها نسبت به آنتی بیوتیک ها، آنها دیگر بهترین راه حل برای جلوگیری از آلودگی بیولوژیکی در کشت شما باقی نمی مانند.

صفحه قبل 1 صفحه بعد